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TC、TG實(shí)驗(yàn)方法

發(fā)布時間: 2024-08-20  點(diǎn)擊次數(shù): 156次

一、組織樣本

1、同樣還是用等滲緩沖液,按重量體積1:9,制備勻漿,2500rpm*10min,取上清即10%勻漿用于TG、TC的測定(提取的不充分,但也能測定)

2、用有機(jī)溶劑提取,a:用無水乙醇作勻漿介質(zhì),按上面方法制備勻漿待測,提取效果比等滲緩沖液好

b:用特殊有機(jī)溶劑提取(如氯仿甲醇混合液等)提取效果好,但由于高揮發(fā),測定不準(zhǔn)確,所以一般需用N2吹干后用無水乙醇復(fù)溶后進(jìn)行測定。

二、培養(yǎng)細(xì)胞

1、用PBS洗細(xì)胞

2、加入500ul乙醇,使之鋪滿培養(yǎng)皿,培養(yǎng)皿內(nèi)的細(xì)胞泛白時把培養(yǎng)皿斜放,用細(xì)胞刮板將細(xì)胞刮下來,使細(xì)胞浸泡在乙醇中

3、用移液器把細(xì)胞和乙醇移到玻璃勻漿器中,碾磨3分鐘成懸液

4、收集懸液,4000 rpm*10min離心,取上清50ul測定

三、奶樣

新鮮或者凍存的奶樣本,用無水乙醇按照不同比例進(jìn)行提?。虡樱簾o水乙醇=1:1、1:4、1:9、1:19、1:49、1:99)充分漩渦混勻2分鐘,4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,取上清按操作表操作。

按稀釋度、結(jié)果做濃度曲線,取直線線性段的濃度為宜。

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